ÈESKÁ UROLOGIE / CZECH UROLOGY – 4 / 2017

291 Ces Urol 2017; 21(4): 289–298 ORIGINÁLNÍ PRÁCE v klinické diagnostice? A mají pøínos pro klinic- kou praxi? V tomto èlánku se zamìøíme na analýzu kvality ejakulátu pomocí prùtokové cytometrie. Základním cytometrickým vyšetøením je stanovení koncen­ trace spermií a pøítomnosti leukocytù v ejakulátu. Pomocí specifického znaèení spermií je možné zjistit zastoupení živých a apoptotických spermií v ejakulátu, ovìøit integritu akrozomu nebo sta- novit fragmentaci DNA ve spermiích. Kombinací tìchto metod získáme mnoho informací o kvalitì ejakulátu a na základì výsledkù mùžeme doporuèit andrologickou léèbu pacientùm s ménì kvalitními spermiemi nebo zvolit nejvhodnìjší metodu in vitro reprodukce (5, 6). MATERIÁL A METODY Soubor pacientù Vyšetøili jsme 800 mužù z párù s poruchou plod- nosti ve vìku 21–66 let léèených v Centrech asis- tované reprodukce GENNET, s. r. o. Ejakulát byl v odbìrových místnostech odebrán masturbací do oznaèené sterilní nádobky po doporuèené tøí až pìtidenní pohlavní abstinenci. U všech vzorkù byl proveden spermiogram v Laboratoøi IVF GENNET Archa nebo Laboratoøi IVF GENNET Kostelní, poté následovalo vyšetøení prùtokovou cytometrií v Imunologické laboratoøi GENNET. Metody Spermiogram Vyšetøení spermiogramu bylo provedeno podle doporuèení WHO 2010. Soubor pacientù zahrnoval 366 normozoospermikù a 434 pacientù s patolo- gickým spermiogramem (tabulka 1). Cytometrické vyšetøení Zpracování ejakulátù bylo zahájeno v Imunologické laboratoøi zpravidla do jedné hodiny, maximálnì do ètyø hodin od odbìru. Ke vzorkùm byly pøidá- ny specifické fluorescenèní reagencie a poté byly vzorky zmìøeny na prùtokovém cytometru Navios Beckman Coulter. Hodnocení namìøených dat bylo provedeno softwarem Kaluza, verze 1.5. Stanovení poètu živých a apoptotických spermií Vzorek èerstvého ejakulátu jsme zpracovali podle instrukcí uvedených v soupravì ApoFlowEx ® FITC kit (Exbio Praha, a. s.). Ke znaèení bunìk jsme použili Annexin V – FITC (AN), který se váže na fosfatidylserin na povrchu apoptotických bunìk, a propidium jodid (PI), který prostupuje do mrt- vých bunìk. Na obrázku è. 1 jsou zøejmé tøi základní popula- ce bunìk: živé spermie (AN- PI-), èasnì apoptotické spermie (AN+ PI-), mrtvé a pozdnì apoptotické spermie (AN- PI+ a AN+ PI+). Uvedený postup zna- Tab. 1. Pøehled vzorkù ejakulátu rozdìlený podle výsledkù spermiogramu a apoptózy spermií. ApoHigh vzorky obsahují >50 % apoptotických spermií v ejakulátu Tab. 1. Samples´ overview of the number of semen samples divided according to the semen analyses results and the number of samples with increased apoptotic sperm frequency (ApoHigh). ApoHigh samples contain more than 50 % of apoptotic sperm Hodnocení spermiogramu Poèet Poèet a procentuální zastoupení ApoHigh vzorkù Normozoospermie 366 62 (16,9 %) Oligozoospermie 89 32 (36,0 %) Asthenozoospermie 120 52 (43,3 %) Oligoteratozoospermie 20 10 (50,0 %) Asthenoteratozoospermie 39 24 (61,5 %) Oligoasthenozoospermie 40 26 (65,0 %) Oligoasthenoteratozoospermie 126 95 (75,3 %) Celkem 800 301 (37,6 %)